การ ศึกษา การ สี Myeloperoxidase ช่วย บํารุง การ ตรวจ สอบ โรค เลือด

การย้อมสี Myeloperoxidase (MPO) หรือที่เรียกว่าการย้อมสี leukocyte peroxidase (POX) เป็นวิธีการย้อมสีทางเคมีเซลล์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย ส่วนใหญ่ใช้สำหรับการย้อมสีเซลล์ไขกระดูกและสเมียร์เลือด เทคนิคนี้ตรวจจับกิจกรรม peroxidase ภายในเซลล์เพื่อช่วยในการวินิจฉัยความผิดปกติทางโลหิตวิทยา โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการจำแนกมะเร็งเม็ดเลือดขาว

การย้อมสี MPO อาศัยปฏิกิริยาเร่งปฏิกิริยาของ peroxidase ภายในเซลล์ เอนไซม์นี้จะสลายออกไซด์เพื่อสร้างออกซิเจน ซึ่งจะทำปฏิกิริยากับโพแทสเซียมไอโอไดด์เพื่อสร้างไอโอดีน ไอโอดีนรวมกับสีย้อม Wright-Giemsa ทำให้เกิดเม็ดสีในไซโตพลาสซึมที่เผยให้เห็นการกระจายตัวของ peroxidase ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ เซลล์ชนิดต่างๆ แสดงปริมาณและรูปแบบการกระจายตัวของ peroxidase ที่แตกต่างกัน ทำให้การย้อมสี MPO สามารถแยกแยะระหว่างเซลล์เหล่านั้นได้

การย้อมสี MPO มาตรฐานต้องใช้ชุดน้ำยาพิเศษเพื่อให้มั่นใจในความถูกต้องและความน่าเชื่อถือ ชุดทั่วไปประกอบด้วย:

• สารละลาย A: สารละลายอีโอซิน - สีย้อมที่เป็นกรดที่ย้อมไซโตพลาสซึมเป็นสีแดงหรือสีชมพู
• สารละลาย B: Azure II - สีย้อมพื้นฐานที่ย้อมนิวเคลียสเป็นสีน้ำเงินหรือสีม่วง
• สารละลาย C: บัฟเฟอร์ PBS โพแทสเซียมไอโอไดด์ - มีสารตั้งต้นปฏิกิริยา peroxidase และรักษาเสถียรภาพของ pH
• สารละลาย D: สีย้อม Wright-Giemsa - สีย้อมอเนกประสงค์ที่ช่วยเพิ่มสัณฐานวิทยาของเซลล์

ชุดมีจำหน่ายในขนาดต่างๆ (การทดสอบ 5 ครั้ง, การทดสอบ 20 ครั้ง และการกำหนดค่าการทดสอบ 100 ครั้ง) เพื่อรองรับความต้องการของห้องปฏิบัติการที่แตกต่างกัน

1. การเตรียมสารละลายทำงาน: ผสมสารละลาย C กับสารละลาย D (โดยทั่วไปอัตราส่วน 1.0 มล.:250µl) ใช้ภายในสองชั่วโมง
2. การตรึงสเมียร์: ตรึงสเมียร์ไขกระดูกหรือเลือดที่เตรียมไว้ด้วยเมทานอลหรือเอทานอลเป็นเวลา 5-10 นาที
3. การย้อมสี: จุ่มสเมียร์ที่ตรึงไว้ในสารละลายทำงานเป็นเวลา 5-10 นาที ควบคุมอุณหภูมิและความชื้น
4. การล้าง: ล้างเบาๆ ด้วยน้ำกลั่นหรือบัฟเฟอร์ PBS เพื่อขจัดสีย้อมส่วนเกิน
5. การย้อมสีซ้ำ (ทางเลือก): ใช้ฮีมาทอกซิลิลินเพื่อเพิ่มความคมชัดของนิวเคลียส
6. การทำให้แห้ง: อากาศแห้งหรือใช้เครื่องเป่าผม
7. กล้องจุลทรรศน์: ตรวจสอบสเมียร์ที่ย้อมสีเพื่อประเมินกิจกรรมและการกระจายตัวของ peroxidase

การตีความผลลัพธ์ต้องใช้ความเชี่ยวชาญพิเศษ ผลลัพธ์ทั่วไป ได้แก่:

• ปฏิกิริยาเชิงบวก: เม็ดสีในไซโตพลาสซึมสีน้ำตาลแดงถึงสีน้ำเงินเข้ม (บวกอ่อนๆ เทียบกับบวกเข้ม) เม็ดสีอาจครอบคลุมไซโตพลาสซึมทั้งหมดหรือบดบังนิวเคลียส
• ปฏิกิริยาเชิงลบ: ไซโตพลาสซึมสีน้ำเงินโดยไม่มีเม็ดสีและนิวเคลียสสีม่วงแดงสม่ำเสมอ
• Eosinophils: แสดงการย้อมสีสีน้ำเงินเข้มเข้มข้น บางครั้งมีผลึกคล้ายเข็มภายนอกเซลล์

• การจำแนกมะเร็งเม็ดเลือดขาว: แยกแยะมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดไมอิลอยด์ (MPO-positive) จากชนิดลิมฟอยด์ (MPO-negative) ซึ่งเป็นแนวทางในการตัดสินใจในการรักษา
• การวินิจฉัยมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดเฉียบพลัน (AML): ยืนยันต้นกำเนิดของไมอิลอยด์และช่วยในการจำแนกชนิดย่อย โดยมีอัตราการเป็นบวกที่แตกต่างกันซึ่งบ่งบอกถึงชนิดย่อยของ AML ที่แตกต่างกัน
• การประเมินกลุ่มอาการไขกระดูกผิดปกติ (MDS): ประเมินการเจริญเติบโตและความแตกต่างของเซลล์ โดยมีรูปแบบ MPO ที่ผิดปกติซึ่งบ่งบอกถึง MDS
• ความผิดปกติทางโลหิตวิทยาอื่นๆ: มีประโยชน์ในการวินิจฉัยมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดเรื้อรังและภาวะไขกระดูกแข็ง

• คุณภาพของน้ำยาและสภาพการเก็บรักษา
• การปฏิบัติตามโปรโตคอลอย่างเคร่งครัด
• การเตรียมสเมียร์ที่เหมาะสม
• ระยะเวลาการย้อมสีที่เหมาะสม
• การประเมินด้วยกล้องจุลทรรศน์โดยผู้เชี่ยวชาญโดยพยาธิแพทย์

ความก้าวหน้าทางเทคโนโลยียังคงช่วยเพิ่มการย้อมสี MPO เคมีภูมิคุ้มกันในปัจจุบันรวม MPO กับเครื่องหมายภูมิคุ้มกันเพื่อความแม่นยำที่มากขึ้น ในขณะที่การไหลเวียนของเซลล์ช่วยให้ตรวจจับ MPO เชิงปริมาณได้ ในขณะที่วิธีการทางเคมีเซลล์แบบคลาสสิกนี้พัฒนาขึ้น มันสัญญาว่าจะให้การมีส่วนร่วมที่มากขึ้นในการวินิจฉัยและการรักษาทางโลหิตวิทยา